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細胞轉染率低,轉染試劑要全背鍋嗎?
發(fā)布時間: 2021-09-24 點擊次數(shù): 1174次目前細胞轉染技術主要分為三大類:化學法、物理法及生物學法。但是沒有一種方法是通用并且準確無誤的,所以只有依據(jù)自己的實驗要求或者實驗探索選擇理想的方法,才能獲得漂亮的實驗結果。當然也可以在前輩們發(fā)的文獻中多看看,前車之鑒可以減少很多不必要的花費。
細胞轉染低都是轉染試劑的問題嗎?純度不夠確實會有這樣的問題,所以選擇轉染試劑很重要,其次還需要考慮以下幾點影響:
1. 其他微生物污染
您覺得您養(yǎng)的細胞 ,不,不,不 ,可能您只知道您養(yǎng)的是細胞,你不知道的是您的細胞可能背著您養(yǎng)了一群小三,比如支原體,病毒,黑膠蟲等等,特別是支原體它可以更改細胞的特性,穿透細胞膜進行基因改造,培養(yǎng)幾代可能看不到“它"給細胞做的整容效果,但是隨著代次的增多,細胞就慢慢體現(xiàn)出來了,“它"已經(jīng)變得不是從前的那個“它"了,所以建議在轉染之前進行一次支原體檢測,如有支原體清除干凈再轉染。
2.交叉污染:
如果同時養(yǎng)了很多細胞,在操作的時候沒有規(guī)范化,然后不小心讓A細胞到B細胞家里走了個親戚,最后的結果可能就是A細胞和B細胞不離不棄,若B細胞比較強悍,可能會發(fā)生鳩占鵲巢的事情。所以操作的時候一定要注意,發(fā)生不明確的交叉污染,寧可錯殺一千,不要放過一個。
3.轉染高不高,時機很重要
轉染細胞真的沒有那么容易 ,想什么時候都可以,就像不尿急,占個廁所也拉不出來,相比非分裂的細胞—正在分裂的細胞往往會比靜止細胞更容易攝取并表達外源DNA,因此對大多數(shù)操作而言,細胞一般建議在轉染當天或者前一天種板,需要注意的是,鋪板細胞不宜過多,特別是瘋長的癌細胞,因為如果細胞較多,甚至互相疊加,細胞自己都吃不飽,住不好,它也糟心的很,哪有時間和您玩轉染?
4. 抗生素和血清帶偏的轉染效果
本來想 ,能讓個細胞好好生長不容易 ,為了防治心里覺得細胞可能產(chǎn)生的各種污染 ,于是給他們加上各種抗生素預防,比如青霉素和鏈霉素,在細胞轉染的時候,若含有這兩個組分,可增加細胞的通透性,導致轉染過低或者細胞全死亡,所以細胞它是不會說話 ,要是會說話,肯定要罵我們了 ,好好的為啥一直給他們吃各種的藥。有些轉染技術如脂質(zhì)體轉染在有血清存在的情況下效率會很低,因此轉染前要去除血清。
5. 另外DNA不純,攜親戚上陣或內(nèi)毒素超標,都會引起轉染效果偏低或者細胞死亡現(xiàn)象的發(fā)生,還是回到開頭的那句話,選擇合適的試劑,多參考前輩們的意見。