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    細胞培養之真菌細菌污染的防治方法

    發布時間: 2021-09-24  點擊次數: 4370次

    請遵守細胞污染永恒定律:無論什么細胞只要是不重要的細胞污染了,立刻加84棄之,重新復蘇新凍存管培養;實在需要挽救的請參考以下:


    細菌污染:主要有洋蔥霍爾伯德菌型污染

    確定是非常珍貴的細胞 建議分別配置含10倍慶大霉素和兩性霉素溶液(G/A)的PBS和5倍慶大霉素和兩性霉素溶液(G/A)的*培養基各一份。然后先用10倍雙抗的PBS洗滌細胞5-10次, 然后用5倍雙抗的*培養洗滌細胞3次以上,再加上含雙倍的G/A溶液放培養箱培養,一個小時后換液,持續4個小時后,再加上正常培養細胞所需的抗生素,過夜,到最終確定細胞沒有任何污染物,因此時細胞受損過大,建議優化培養基方式(血清提高2%-5%)或者立即凍存細胞,一個月后復蘇。


    真菌污染:

    污染的多是曲霉菌,白色念珠菌,酵母菌,黑霉菌,孢子菌,真菌主要以預防為主,防治為輔,已經污染了,建議采用以下方法:

    1. 細胞一旦污染,很難挽救,即使使用制霉菌素或放線菌素D,也是傷敵八千自損一萬的辦法,可使用抗生素進行查殺,但是高濃度的抗霉菌素對細胞有毒性作用。

    2. 把所有細胞從污染的CO2孵箱轉移,采用過氧乙酸擦洗孵箱(全部,尤其四個角)。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后,再移入細胞;

    3. 用0.5%新潔爾滅擦拭超凈臺和墻壁,確保不留死角,地面用新潔爾滅消毒液拖地。

    4. 將環境*消毒,整個培養間高錳酸鉀或者乳酸熏蒸,孵箱內部包括托盤等全部用苯酚搽洗,封閉2天。


    真菌污染預防方法:

    1),將細胞移出來,用微量硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤里加適量硫酸銅或者酸氫二鈉高鹽液體防止霉菌

    2)孵箱應定期清潔,大約一個月左右清潔一次,

    3)可在培養基里加兩性霉素或制霉菌素)或[放線菌素D或雙抗進行預防。

    4)最主要的還是要培養良好的無菌觀念,實驗室盡量不要大聲說話,佩戴好口罩,手套,操作時應小心,避免培養基撒入培養箱以及生物安全柜,這些撒入培養箱的培養基為細菌及真菌的繁殖提供了很好的條件。




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