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qPCR中的絕對定量是什么?
發(fā)布時間: 2021-10-14 點擊次數(shù): 4050次絕對定量目的是使用PCR測定目的基因在樣本中的數(shù)量,即拷貝數(shù)。
在絕對定量中,想要得到目的基因的拷貝數(shù),需要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖需要將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至不同濃度,作為模板進行PCR。標(biāo)準(zhǔn)品是已知濃度的模板。
結(jié)束PCR后,以測得的CT值為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
對待測樣品的目的基因進行檢測時,只需要將得到的CT值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,即可計算出樣品中目的基因的拷貝數(shù)。
需要注意的是:
1、標(biāo)準(zhǔn)品必須來源可靠、濃度已知
2、標(biāo)準(zhǔn)品要和待測樣品要同時在儀器中擴增
3、只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品覆蓋的濃度范圍,進行樣品濃度的推測
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