欧美精品成人A在线观看,麻豆国产AV超爽剧情系列,97人妻天天摸天天爽天天,精品人妻无码AV一区二区

銷售熱線

19126518388
  • 技術文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術文章 > 氨甲喋呤抗性和DHFR擴增實驗方法

    氨甲喋呤抗性和DHFR擴增實驗方法

    發布時間: 2021-10-29  點擊次數: 949次
    材料與儀器

    中國倉鼠細胞或生長快的人或小鼠細胞系 氨甲蝶呤鈉鹽
    0.15mol LNaCl
    組織培養瓶 吸管 不含胸苷和次黃(口票)呤的培養瓶 倒置顯微鏡 液氮罐

    實驗步驟

    1. 克隆培養親代細胞形成生長旺盛、基因型一致的細胞群體,用于篩選。

    2. 用無菌 NaCl 0.15 mol/L ( 0.85 % ) 稀釋 MTX,臨床使用的包裝是濃度為 2.5 mg/ml 的溶液。

    3. 在幾個相同的培養瓶中分別種 2.5×105 個細胞,每個培養瓶中加入不含 MTX 或含 0.01 μg/ml、0.02 μg/ml、0.05 μg/ml 和 0.1 μg/ml MTX 的*培養基,將培養基的 pH 調至 7.4,37°C 培養 5~7 天。

    4. 在倒置顯微鏡下觀察細胞,如果培養瓶中出現有一小部分細胞克隆生長,其余的一些細胞是變大的,附著在基質層上的可能要死的細胞,選擇這種培養瓶的細胞,換含有相同量 MTX 的新鮮培養基繼續培養。

    5. 如果需要,可以更換新鮮培養基,再培養 5~7 天,但是細胞必須始終處于 MTX 環境中。當細胞密度達到 2~10×106 個/瓶,將細胞以每瓶 2.5×105 個傳入新培養瓶,分別加人原濃度的 MTX 和 2~10 倍原濃度的 MTX 。

    6. 5~7 天后觀察新傳代的和原來加入較高濃度 MTX 的細胞,更換培養基,選擇可用細胞,方法同前。

    7. 每步傳代的細胞用逐步增高的藥物濃度持續篩選,直至獲得要求的耐藥水平。改變而獲得低到中等水平耐藥、DHFR 活性增加和(或)轉運能力改變的中同倉鼠細胞需要 2~3 個月;對于中國倉鼠細胞、小鼠細胞或生長快的人的細胞來說,獲得高水平耐藥性和酶過度產生的變異株需要 4~6 個月或更長時間。

    8. 定期凍存篩選中的細胞于液氮中。


產品中心 Products