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    酵母和細菌蛋白質的代謝放射標記的方法

    發布時間: 2021-11-08  點擊次數: 899次
    材料與儀器

    細胞
    基本培養基

    實驗步驟

    1. 接種細胞于只含有必需氨基酸和輔因子的已知成分的基本培養基,于合適溫度中度振蕩培養過夜。

    2. 用新鮮的基本培養基稀釋培養物,繼續溫育至 107 細胞/ml (酵母)或對數期中期(細菌)。

    3. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細胞,用無硫酸鹽基本培養基重懸至 107 細胞/ml(酵母)或 5X108 細胞/ml(細菌)。

    4. 加 H235SO4 至終濃度 20 μCi/ml。于適宜溫度輕度振蕩培養 1 小時(酵母)或 20 分鐘(細菌)。

    5. 5000 g 室溫離心 10 分鐘收集細胞,吸出培養基,倒入放射性廢料桶。

    6. 用冰冷的基本培養基重懸細胞,如第 5 步離心收集細胞。將上清倒入放射性廢料桶。用巴氏滴管吸去離心管壁殘存的上清。


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