SH-SY5Y細(xì)胞于1970年構(gòu)建，是骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)3次克隆后得到的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。

如今，SH-SY5Y細(xì)胞已經(jīng)是科學(xué)研究中較為常用的細(xì)胞系之一了。

但很多人在養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞的過(guò)程中，總會(huì)遇到各種問(wèn)題。今天，小編來(lái)為大家一一解答。

常溫運(yùn)輸過(guò)程中，細(xì)胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現(xiàn)皺縮、聚團(tuán)甚至脫落的現(xiàn)象。

遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細(xì)胞就能恢復(fù)正常生長(zhǎng)。

常溫細(xì)胞收貨后，把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)即可。

如果4小時(shí)后細(xì)胞仍然沒(méi)有鋪展開(kāi)，密度適中的前提下可以放培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜（過(guò)夜前倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。

常溫細(xì)胞收貨后，先把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)，再進(jìn)行傳代。

傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。

常溫細(xì)胞收貨后，先把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)再處理。

脫落后的細(xì)胞通常聚團(tuán)漂浮，通過(guò)離心將漂浮的細(xì)胞團(tuán)收集起來(lái)，在離心管里進(jìn)行胰酶消化后重新鋪板即可。

貼壁細(xì)胞常規(guī)方法消化下來(lái)，和處理好的脫落細(xì)胞合并，混勻后鋪板。

SH-SY5Y細(xì)胞生長(zhǎng)較緩慢。在培養(yǎng)過(guò)程中，有以下幾點(diǎn)需要注意。

MEM/F12和DMEM/F12都可以培養(yǎng)SH-SY5Y，并且都有相應(yīng)的文獻(xiàn)支持。但這兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)出來(lái)的形態(tài)會(huì)有細(xì)微差異。

另外，使用品質(zhì)好的胎牛血清將極大改善細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。

因其神經(jīng)母細(xì)胞瘤的特性，SH-SY5Y細(xì)胞成簇生長(zhǎng)，飽和密度大。

有時(shí)顯微鏡下看著密度不高，但細(xì)胞簇實(shí)際密度大，所以培養(yǎng)基很快就變黃了。這時(shí)候，需及時(shí)換液。

當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)一周都無(wú)法傳代時(shí)，可以將細(xì)胞消化下來(lái)，接種到更小的容器中，人為增加細(xì)胞密度，從而促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。

平時(shí)傳代時(shí)也要注意接種密度不能太低。

不建議連續(xù)消化細(xì)胞，連續(xù)消化細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差。

傳代時(shí)消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，通常1-3min即可，若細(xì)胞解離太快可適當(dāng)用PBS稀釋胰酶。

吹打細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作輕緩一些，減少對(duì)細(xì)胞的物理刺激。

▲ SH-SY5Y正常生長(zhǎng)照片

SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞同時(shí)存在，貼壁細(xì)胞呈上皮樣，有短觸角延伸出來(lái)，傾向于成簇生長(zhǎng)，容易成團(tuán)。

有文獻(xiàn)報(bào)道，SH-SY5Y在懸浮狀態(tài)也能維持生長(zhǎng)。

SH-SY5Y生長(zhǎng)時(shí)，大部分為貼壁細(xì)胞，少量為懸浮細(xì)胞。 如果SH-SY5Y出現(xiàn)大量懸浮的細(xì)胞，就需要引起注意了。

另外，SH-SY5Y細(xì)胞非常敏感，在受到溫度、化學(xué)或物理刺激后容易出現(xiàn)成團(tuán)現(xiàn)象。

一個(gè)視野下，有少量成團(tuán)現(xiàn)象，無(wú)需特殊處理。成團(tuán)嚴(yán)重，幾乎沒(méi)有鋪展開(kāi)的細(xì)胞并且培養(yǎng)數(shù)天未展開(kāi)時(shí)，就需要按以下方法特殊處理一下了。

▲ 成團(tuán)較嚴(yán)重的SH-SY5Y細(xì)胞