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大鼠星型膠質細胞培養實驗——胰酶消化法
發布時間: 2021-12-05 點擊次數: 1094次材料與儀器
SD大鼠
苯巴(匕匕)妥 解剖液 胰蛋白酶 Dnase DM培養液
離心管 培養箱 手術器材步驟
一、 取14.5d SD大鼠一只。
二、 苯巴(匕匕)妥0.5 ml 腹腔注射,待麻醉后置于手術臺上,酒精棉球消毒皮膚,開腹取出子宮(約12-14個),放入解剖液中,剖開子宮,取出胚胎,放入解剖液中,在耳眼之間離斷,取頭側部組織,去除腦膜組織,取原始中腦區組織,放入離心管裝的解剖液中,待全部取出后,1500轉2分鐘。
三、 用吸管吸出上清液,在組織細胞沉淀中加入胰蛋白酶一管(1 ml/vial),室溫30分鐘,1500轉,離心5分鐘(離心前可加入解剖液以終止胰酶作用)。
四、吸去上清,在組織細胞沉淀中加入Dnase 一管(2 ml/vial),37℃反應10分鐘,1500轉,離心5分鐘,吸去上清,在組織細胞沉淀中加入2 ml DM培養液吹打,計數(計數公式為(N1+N2+N3+N4)/4x104),以3x105個/瓶在培養瓶中培養,做好標記(時間、原代的還是第幾代傳代,姓名,細胞名稱等),放入培養箱中培養。- 下一篇:細胞培養常遇問題集錦(十二)
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