欧美精品成人A在线观看,麻豆国产AV超爽剧情系列,97人妻天天摸天天爽天天,精品人妻无码AV一区二区

銷售熱線

19126518388
  • 技術文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術文章 > 細胞培養常見問題及解答(三)

    細胞培養常見問題及解答(三)

    發布時間: 2021-12-09  點擊次數: 1321次

    本期分享第三期的細胞培養常見問題的內容,希望對大家有所幫助啦~


    20. 如果細胞發生微生物污染時,應如何處理?

    原則上:直接滅菌后丟棄之。

    當重要的培養污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。

    高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。

    (1)  在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。

    (2)  分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

    (3)  每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。

    (4)  確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2~3代。

    (5)  在無抗生素的培養基中培養細胞一代。

    (6)  重復步驟4。

    (7)  在無抗生素的培養基中培養4~6代,確定污染是否以已被消除。

     



    21. 支原體(mycoplasma) 污染的細胞, 是否能以肉眼觀察出異狀?

    不能。除極有經驗之專家外,大多數遭受支原體污染的細胞株,無法以其外觀分辨之。

     



    22. 支原體污染會對細胞培養有何影響?

    支原體污染幾乎可影響所有細胞的生長參數,代謝及研究的任一數據。故進行實驗前,必須確認細胞為mycoplasma-free,實驗結果的數據方有意義。

     



    23. 偵測出細胞株有支原體污染時, 該如何處理?

    直接滅菌后丟棄,以避免污染其它細胞株,但是如果您的樣本珍貴,建議您使用支原體去除試劑去除污染



    24. CO2 培養箱的水盤如何保持清潔?

    定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

     



    25. 為何培養基保存于4℃ 冰箱中, 顏色會偏暗紅色,且pH值會越來越偏堿性?

    培養基保存于4℃冰箱中,培養基內的CO2會逐漸溢出,造成培養基越來越偏堿性。而培養基中的酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿的結果,將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時,可以通入無菌過濾的CO2,以調整pH 值。

     



    26. 各種細胞培養用的dish,flask是否均相同?

    不同廠牌的dish 或flask,其所coating 的polymer 不同,制造程序亦不同,雖對大部分細胞沒有太大之影響,惟少數細胞則可能因使用廠牌不同的dish 或flask 而有顯著的生長差異。

     



    27. 購買的細胞冷凍管經解凍后,為何會發生細胞數目太少的情形?

    研究人員在冷凍細胞的培養時出現細胞數目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養基即可。

     



    28. 購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?

    研究人員在細胞培養時出現存活率不佳,常見原因可歸納為:培養基使用錯誤或培養基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養溫度使用錯誤。細胞置于-80℃太久。

     



    29. 如何避免沉淀物的產生?

    我們建議您在使用血清的時候,注意下列的操作:

    (1)  解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),非常容易產生沉淀物。

    (2)  解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。

    (3)  請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。

    (4)  血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

    (5)  若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

     



    30.  L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?

    L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。

     



    31.  GlutaMAX-I是什么?培養細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩定?

    GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。

    GlutaMAX-I二肽非常穩定,即使在121℃滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎*降解。

     



    32. 什么培養基中可以省去加酚紅?

    酚紅在培養基中用作PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養細胞,尤其是哺乳類細胞時,不用加。


    以上就是本期的內容,更多資訊,歡迎關注安培生物科技有限公司了解更多技術與產品資訊。


    安培生物科技有限公司介紹:

    安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶,提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產,包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務;提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品;提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務,努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業。


產品中心 Products