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緩沖液梯度測(cè)序膠
發(fā)布時(shí)間: 2021-12-15 點(diǎn)擊次數(shù): 812次原理
在本實(shí)驗(yàn)方案,測(cè)序膠底部的緩沖液濃度大于其頂部濃度,使得短寡核苷酸片段(膠底部)的遷移率相對(duì)比長(zhǎng)寡核苷酸(頂部)的遷移率要慢一些,這洋凝膠可電泳更長(zhǎng)的時(shí)間而不至于短核苷醆從底部走失并改善了長(zhǎng)核苷酸鏈的分離度。材料與儀器
DNA
TEMED SDS TBE
燒杯 電泳儀步驟
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。2. 在2個(gè)100 ml 燒杯中,配制緩沖液梯度凝膠溶液:50 ml 用0.5×TBE配制,25 ml 用2.5×TBE配制,在50℃以下加熱至固體*溶解,冷卻至室 溫,加人20 μl TEMED和200 μl 10%SDS過硫酸氨于0.5 ×TBE / 凝膠溶液,輕輕混勻。加入10 μl TEMED及100 μl 10%過硫酸銨于2.5×TBE / 凝膠溶液中輕輕混勻。3. 用23 ml 帶橡皮吸球的吸管,吸出12.5 ml 清亮的0.5×TBE / 凝膠溶液,接著吸出12.5 ml 2.5×TBE / 凝膠溶液,可通過輕輕擠壓橡皮吸球以引進(jìn)3~4個(gè)氣泡。4. 緩緩平穩(wěn)地將溶液注入膠模的夾層,接著用同一吸管,加入剩余的0.5×TBE凝膠溶液。如基本方案步驟8~10,插入梳子,安裝夾子,觀察凝膠的聚合。
5. 按基本方案步驟11~33電泳及處理凝膠。同實(shí)驗(yàn)其他方法
變性凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
1. 制作每塊凝膠時(shí),首先要用肥皂及水小心嚴(yán)格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板,用去離子水沖洗后晾干,用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2. 然后用Kimwi
電解質(zhì)梯度測(cè)序膠
1. 按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進(jìn)行預(yù)電泳,但上槽緩沖液為0.5×TBE,下槽為1×TBE。 2. 按基本方案步驟23~26步準(zhǔn)備樣品及加樣。 3.
含甲酰胺的測(cè)序膠
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。 2. 按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液,加熱輕輕挽拌使之溶解,冷卻至30℃以下。 3. 加入0.15 ml TEMED
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安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。
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