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    如何快速測量細胞劃痕寬度?

    發布時間: 2021-12-22  點擊次數: 1385次

    細胞劃痕實驗可謂是性價比高的一個小實驗了。可以在不額外購買實驗設備的情況下,一定程度地評價腫瘤細胞或者成纖維細胞的遷移能力。


    圖片


    在課題組經費的限制下,這個實驗成為很多老板的*。



    細胞劃痕實驗本身的操作很簡單,網上有很多教程,此處不贅述。當你辛辛苦苦拿到了下面這張照片時,說明你已經成功了一大半。


    image.png


    接下來的工作就是測量,本文將以此為例,寫出測量的圖文教程。




    1. 下載并安裝Image Pro Plus。


    image.png


    2. 點擊File→Open,打開你需要測量的圖片。

    image.png


    3. 增強細胞劃痕邊界的信號,以提高IPP識別準確度。點擊Process,點擊過濾器Filters。

    image.png



    4. 在Filters彈窗中,依次選擇以下參數,需要做3步。



    (4.1)在Edge選項下,選擇Sobel。然后鼠標拖右側的小窗口,將細胞劃痕的邊緣拖到這個窗口處,意在增強這個邊界。

    image.png


    點擊Apply之后,可以看到目標圖片已經發生改變,邊界更加清晰了。


    image.png


    (4.2)在Morphological選項下,選擇Close。然后鼠標拖右側的小窗口,使得細胞占滿這個窗口。此步意在通過算法將細胞區域中的空隙都填充上顏色,以提高IPP的自動識別準確度。


    image.png


    點擊Apply之后,可以看到目標圖片再次發生改變。


    image.png


    (4.3)在Enhancement選項下,選擇Lopass,選擇5X5,然后鼠標拖右側的小窗口,使得劃痕邊界處在這個窗口。此步驟意在調整劃痕邊界的平滑度。


    image.png


    點擊Apply之后,可以看到目標圖片又一次發生改變。


    image.png


    5. 增強圖片的對比度。


    (5.1)點擊Enhance,選擇Contrast Enhancement,調出下面的設置界面彈窗。


    image.png


    (5.2)拉動圖中的曲線,以獲取合適的對比度。(當然你也可以點擊彈窗中Save選項,保存這個對比度文件。后面測量其它圖片時,到了這一步可以點擊Load調出設置文件。這種操作更有利于減小測量誤差。)


    image.png


    6. 點擊矩形工具,將圖中的細胞寬度框選。如下圖。


    image.png


    7. 點擊Measure中的count/size選項,彈框中點擊measrue,再點擊select measurement。測量參數選擇Area和Box Height。調整Area最小測量值為1000,以便于過濾小面積區域。(注意:如果你的細胞劃痕圖像是橫著的,那就要選擇Box width)。點擊OK。



    8. 最關鍵的一步。在manual模式下,點擊select colors,進入選色界面。在HSI模式下通過調整0-255數值或拉動圖中曲線,保證我們畫的矩形選框中盡可能的被填滿紅色。


    同樣的,你可以點擊彈窗中的File按鈕來保存你的設置文件,測量其它圖片時之間調用,以減小測量誤差。完成后點擊close。



    9. 在count/size界面選擇Option,然后按照下圖進行設置。最關鍵的是選擇filled。完成后點擊OK。



    10. 點擊count,可以看到劃痕區域被選擇為多個測量區域,且存在一個最大測量區域被紅色全部充滿。這樣的測量才是符合的。


    image.png


    11. 點擊View,查看數據。其中最大面積及其對應的高度值就是我們需要的數據。



    12. 細胞劃痕寬度



    細胞劃痕平均寬度=細胞劃痕最大測量面積 / 對應的長度



    (eg,本例中細胞劃痕最大的測量面積是1954623,對應長度為2531,那么細胞劃痕平均寬度就是772.3)


    13. 測量單位的問題


    首先,你的所有圖片應該是在同一倍數的鏡下拍攝,一般10X。此時你采用IPP測量的寬度數值單位是“像素",如果是多組間的比較,是否有單位對于組間比較無影響。


    至于這個像素所代表的實際尺寸,則必須在該顯微鏡10X倍數下重新拍攝一個標尺,然后使用這個標尺進行像素與尺寸的換算,最終得到細胞劃寬度的實際尺寸。



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