(1)CO2張力不對。
(2)培養瓶蓋擰得太緊。
(3)NaHCO3緩沖系統緩沖力不足。
(4)培養液中鹽濃度不正確。
(5)細菌、酵母或真菌污染。

(1)按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5%到10%。
(2)松開瓶蓋1/4圈。
(3)改用不依賴CO2培養液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。
(4)在CO2培養環境中改用基于Earle′s鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks鹽配制的培養液。
(5)丟棄培養物，或用抗生素除菌。

可能原因：

建議解決方法：

(1)細菌或真菌污染。

(1)丟棄培養物，或用抗生素除菌。

(1)胰蛋白酶消化過度。
(2)支原體污染。
(3)培養瓶瓶底不干凈。

(4)培養液pH值過堿(NaHCO3分解)。

(5)消化液或培養液配制錯誤、過期儲存、儲存不當。
(6)細胞老化(如傳代前細胞已匯合導致失去貼附性)。
(7)接種細胞起始濃度太低或太高。

(1)縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度。
(2)分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。
(3)注意刷洗，或換用一次性塑料培養瓶。
(4)使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2(將培養液敞口放入培養箱也可)。
(5)重新配置消化液或培養液。
(6)啟用新的保種細胞。
(7)調節最佳接種細胞濃度。

(1)培養液中含鈣、鎂離子。
(2)支原體污染。
(3)蛋白酶過度消化使得細胞裂解釋。
(4)DNA污染。

(1)用無鈣鎂平衡鹽氵容液洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。
(2)分離培養物，檢測支原體。如發現支原體污染，丟棄培養物。
(3)用DNase I處理細胞。 

(1)原代培養組織在進入培養前已污染。

(1)培養前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復沖洗組織。

(1)由于更換不同培養液或血清。

(2)培養液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。
(3)培養物中有少量細菌或真菌污染。
(4)試劑保存不當。
(5)接種細胞起始濃度太低。
(6)細胞已老化。
(7)支原體污染。

(1)比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。讓細胞逐漸適應新培養液。
(2)換入新鮮配制培養液，或補加谷氨酰胺及生長因子。
(3)用無抗生素培養液培養，如發現污染，丟棄培養物。或用抗生素除菌。
(4)血清需保存在-5℃到-20℃。培養液需在2-8℃避光保存。含血清*培養液在2-8℃保存，并在2周內用完。
(5)增加接種細胞起始濃度，換用新的保種細胞。
(7)分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。

(1)培養箱內無CO2。
(2)培養箱內溫度波動太大。
(3)細胞凍存或復蘇過程中損傷。
(4)培養液滲透壓不正確。
(5)培養液種有毒代謝產物堆積。
(6)更多原因參考問題4和問題7。

(1)檢測培養箱內CO2。
(2)檢查培養箱內溫度。
(3)取新的保存細胞種。
(4)檢測培養液滲透壓。注意：大多數哺乳動物細胞能耐受滲透壓為260– 350 mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養液滲透壓。
(5)換入新鮮培養液。