步驟

1. 準備下列試劑和材料：

60 mm MEF 滋養板（接種不能超過 7 天）

帶棉塞無菌巴斯德吸管

無 Ca2+ 和 Mg2+ PBS

ES 生長培養基

胰酶溶液

2. PBS 沖洗 ES 細胞，巴斯德吸管加胰酶溶液覆蓋培養皿底（2 ml/p60）

3. 37℃ 孵育 5 分鐘左右，至細胞脫落。

4. 巴斯德吸管輕輕吹吸胰酶處理細胞 4~6 次，分散 ES 細胞。分散的細胞，包括單細胞和小的細胞團，轉移至裝有 2 ml 預熱（37℃）ES 生長培養基的 15 ml 離心管。

5. 離心收集細胞。吸掉上清，留約兩倍于細胞沉淀的體積。輕彈離心管懸浮細胞。加 10 ml ES 生長培養基，吹吸至懸液均勻。

6. 計數細胞。由于 ES 細胞較 MEF 細胞小，呈圓形，二者很容易區分。

7. ES 細胞接種 60 mm MEF 滋養板。吸掉 MEF 滋養細胞培養基，加入懸于 5 ml ES 生長培養基的 ES 細胞。

8. 每天換一次液，加 5 ml ES 生長培養基。