1.首先確定模板 RNA 完整性好，無 DNA 污染。

2.RNA 模板中不應含有擴增反應抑制劑。

3.為了防止模板降解，在反應體系中加入 RNase 抑制劑 RNasin。

4.使用適量的模板 RNA，模板量太多會降低特異性，太少會導致擴增不出條帶或條帶太弱。

5.若模板中有二級結構，可通過提高逆轉錄反應溫度來提高擴增效果。

6.設計引物時，避免在引物 3’端含有互補序列，避免形成內部發卡結構。

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