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    siRNA轉(zhuǎn)染操作及要點(diǎn)

    發(fā)布時(shí)間: 2023-08-07  點(diǎn)擊次數(shù): 1003次

    轉(zhuǎn)染試劑儲(chǔ)存

    轉(zhuǎn)染試劑-20°C避光保存,Trans Enhancer于2-8°C存放


    體外轉(zhuǎn)染操作流程

    1:細(xì)胞接種:轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞,使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)密度在30-50%

    2:siRNA-Starvio 轉(zhuǎn)染復(fù)合物準(zhǔn)備:Starvio 用25ulTrans Enhancer 稀釋室溫孵育5min將siRNA稀釋液與 Starvio 稀釋液混合(總體積50ul)

    將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi) 


    注意事項(xiàng)

    1:建議對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化,特別是第一次使用。例如:24孔培養(yǎng)板,siRNA 用量在 6、12、18、24、30 pmol之間調(diào)整;

    2:Starvio 試劑用量在1.0-3.0ul之間調(diào)整;

    3:轉(zhuǎn)染過(guò)程盡量不要使用抗生素,否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡;

    4:增加計(jì)算接種細(xì)胞的數(shù)量,使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度在30-50%左右。


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