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細(xì)胞爬片免疫組化染色實(shí)驗(yàn)步驟
發(fā)布時間: 2024-01-22 點(diǎn)擊次數(shù): 564次原理:
免疫組織化學(xué)技術(shù):檢測組織原位表達(dá)的肽類、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、受體、表面抗原等抗原性物質(zhì)。
(一)組織和細(xì)胞標(biāo)本的準(zhǔn)備
組織標(biāo)本的取材-取材新鮮,固定及時,形態(tài)完好。
細(xì)胞標(biāo)本的準(zhǔn)備
(1)活體細(xì)胞標(biāo)本:印片法、穿刺吸取法、沉淀法
(2)培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本:
① 細(xì)胞涂片: 將細(xì)胞制成懸液(10^6)涂在 涂有切片粘合劑的載玻片上,晾干后固定(細(xì)胞甩片)。
②細(xì)胞爬片: 將細(xì)胞直接培養(yǎng)在蓋玻片上 將細(xì)胞直接培養(yǎng)在6孔或9孔板上。
3.固定
(1)保持形態(tài):終止和抑制外源性和內(nèi)源性酶活性,防止 組織細(xì)胞的死后變化,防止自溶和腐敗,保持組織細(xì)胞的固有形態(tài)。
(2)保存抗原:使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖和酶等各種抗原成份轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì),以保持它原有的結(jié)構(gòu)和定位與生活時相仿。
(3)硬化作用:固定劑兼有硬化作用、使組織硬化、增加組織硬度、便于制片。
(4)便于觀察:使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來而產(chǎn)生不同的折射率,造成光學(xué)差異,以便染色后易于鑒別和觀察;經(jīng)過固定的組織能對染料產(chǎn)生不同的親和力而著色清晰,便于辨認(rèn)。
注意事項(xiàng):
①防止脫片:玻片預(yù)處理(多聚賴氨酸)、溫和操作。
②力求保持組織新鮮, 勿使其干燥, 盡快固定處理。
③組織塊不易過大過厚,必須小于 2cm x 1.5cm x 0.3cm,尤其是組織塊厚度須保持在0.3cm 以內(nèi)。
④固定劑必須有足夠的量,在體積上一般大于組織20倍。
⑤組織固定后, 應(yīng)充分水洗,去除固定劑,以減少固定劑造成的人為假像。
(三)細(xì)胞爬片的免疫組化染色
1. 取出細(xì)胞爬片,迅速置入冷丙酮固定 20 ~30 分鐘。
2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘,2 次。
3. 打孔液浸泡 5 分鐘。
4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘,2 次。
5. 后接前述實(shí)驗(yàn)步驟的第 6 步(正常血清封閉)。
注:第 3、4 步僅用于檢測細(xì)胞內(nèi)抗原,檢測細(xì)胞膜抗原時不用。
深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。可以在第一時間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持,深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴,安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商,公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨,配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,隨時為客戶提供服務(wù)。
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