實時熒光定量PCR實驗會產生大量實驗數據，一般可以用PCR儀自帶的軟件進行收集、分析。但即使有了方便可靠的軟件，我們也需要對原始數據進行檢查、再分析，評估數據的質量和可靠性。

這需要三個基本的步驟。

第一步，查看擴增曲線，有必要時調整基線和閾值。

Ct值由基線和閾值計算得來，所以他們的值對結果影響很大。軟件會給出1個默認的基線和閾值，但不一定是最合適的，需要我們進行手動調整。

首*行基線的調整。

一般范圍是循環數3～15，使得靶基因的擴增信號大于背景噪聲。出現不正常的擴增曲線，通常是因為設置了不正常的基線，需要對單個孔進行設置。

比較好的做法是，基線的最小值（起始循環數）設置在背景噪聲的尾巴后，最大值（結束循環數）設置為擴增起始點。

循環范圍在5個循環就可以，具體跟擴增曲線的對數圖來設定。

擴增曲線的對數圖是什么？下期告訴你