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qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析基本步驟(二)
發(fā)布時(shí)間: 2021-10-15 點(diǎn)擊次數(shù): 4413次閾值,我們?cè)诓僮鬈浖r(shí)上下拉動(dòng)的橫線,是決定Ct值的因素之一。
閾值是熒光信號(hào)相對(duì)于基線有顯著增強(qiáng)的點(diǎn),大多數(shù)儀器會(huì)根據(jù)基線平均信號(hào),自動(dòng)計(jì)算熒光信號(hào)的閾值水平,并設(shè)置一個(gè)比平均值高10倍的閾值。
也就是說(shuō),當(dāng)基線被正確的設(shè)置了,閾值也能手動(dòng)調(diào)整成正確值。
需要注意的是:
1、讀取閾值相關(guān)的分析數(shù)據(jù)時(shí),不能隨意改變閾值的設(shè)置。只有分析不同樣本,或相同樣本不同靶基因時(shí),才能調(diào)整閾值。
2、設(shè)置閾值線時(shí),要在擴(kuò)增曲線的指數(shù)擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)設(shè)置,不能在起始階段,也不能在熒光背景(基線)區(qū)域。
3、每次改變閾值時(shí),要查看標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和R的平方有沒(méi)有改善。沒(méi)有使用標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),也可以計(jì)算3個(gè)復(fù)孔(相同條件擴(kuò)增的樣本)的標(biāo)準(zhǔn)偏差。好的閾值應(yīng)該要改善Ct值的表現(xiàn)。
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