Q：剛收到細(xì)胞，顯微鏡觀察細(xì)胞成片漂浮，該如何處理？

可能是消化過(guò)度導(dǎo)致了部分細(xì)胞的細(xì)胞膜受損、凋亡，部分細(xì)胞膜受到破壞，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。若細(xì)胞形態(tài)有明顯變化，且細(xì)胞表面有明顯黑點(diǎn)，間隙間也有較多黑點(diǎn)，可能是支原體污染，建議空培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基，觀察黑點(diǎn)是否會(huì)增殖。

若還有保種細(xì)胞，請(qǐng)復(fù)蘇靠前代次，并注意觀察拍照，有任何問(wèn)題可以及時(shí)聯(lián)系我司銷(xiāo)售處理售后（需提供細(xì)胞圖片）。

凍管到貨時(shí)的剩余干冰情況、收貨后的保存情況、使用的血清、培養(yǎng)基以及復(fù)蘇操作不當(dāng)?shù)仍蚨伎赡苡绊懠?xì)胞復(fù)蘇情況。

貼壁細(xì)胞：

若復(fù)蘇時(shí)離心，建議48h后換液，如密度達(dá)到10%，則繼續(xù)按說(shuō)明書(shū)正常操作培養(yǎng)；若復(fù)蘇時(shí)沒(méi)有離心，建議收集懸浮細(xì)胞后重新接種。若細(xì)胞依然無(wú)貼壁增殖，請(qǐng)及時(shí)反饋銷(xiāo)售處。

懸浮細(xì)胞：

建議復(fù)蘇48小時(shí)后觀察拍照，若培養(yǎng)基沒(méi)有變色，部分細(xì)胞仍然比較圓潤(rùn)，可繼續(xù)放置培養(yǎng)后48小時(shí)拍照。若細(xì)胞全部皺縮，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系銷(xiāo)售處理售后。

可能原因如下：

1. 沒(méi)有及時(shí)換液，導(dǎo)致培養(yǎng)基酸度增強(qiáng)、營(yíng)養(yǎng)成分降低時(shí)會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞胞漿產(chǎn)生及空泡；

2. 沒(méi)有及時(shí)傳代，細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)密，少數(shù)細(xì)胞開(kāi)始在鋪滿(mǎn)的第一層細(xì)胞上生長(zhǎng)。很多細(xì)胞開(kāi)始漂浮時(shí)，也有部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡變性；

3. 若密度很低，則細(xì)胞密度提高會(huì)有所改善，可以提高血清濃度或更換質(zhì)量更好的血清。若密度高，請(qǐng)及時(shí)更換培養(yǎng)基，注意培養(yǎng)基添加量和換液情況，保證細(xì)胞有足夠營(yíng)養(yǎng)。

細(xì)胞消化時(shí)間一般在2~3min，消化期間請(qǐng)不要晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，部分細(xì)胞需要延長(zhǎng)消化時(shí)間，或用PBS清洗2次，吸干凈瓶里殘留的PBS后用少量胰酶潤(rùn)洗，再次添加1ml胰酶進(jìn)行二次消化。

消化時(shí)放入培養(yǎng)箱，2~3分鐘后取出，用手掌心拍打瓶尾觀察細(xì)胞脫落情況，如沒(méi)有細(xì)胞脫落則繼續(xù)放培養(yǎng)箱。如果消化5分鐘也沒(méi)有脫落或只有輕微細(xì)胞脫落，可以繼續(xù)放培養(yǎng)箱，或把消化下來(lái)的細(xì)胞收集終止消化后，將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞繼續(xù)添加1~2ml胰酶繼續(xù)消化。

當(dāng)細(xì)胞有80%左右脫落且成單個(gè)細(xì)胞后，可終止消化，用吸管吹打瓶里各部位4~8次，盡量用吸管不用槍頭，不要吹出氣泡，然后收集懸液進(jìn)行離心。

剛收到的細(xì)胞如更換了培養(yǎng)基或血清，會(huì)存在變形的情況，屬正常情況，需要一定的適應(yīng)過(guò)程。當(dāng)體外培養(yǎng)時(shí)間增長(zhǎng)后，隨著傳代次數(shù)的增多，細(xì)胞形態(tài)也會(huì)有觸角、拉絲、變瘦等變化，可能與消化時(shí)間和培養(yǎng)條件有關(guān)。

可能原因如下：

1. 可能是棉球纖維、凋亡細(xì)胞片、血清蛋白，或一些無(wú)血清培養(yǎng)基添加因子后的因子析出物，屬于正常現(xiàn)象；

2. 如果是傳代后細(xì)胞堆積成團(tuán)，肉眼可見(jiàn)白色點(diǎn)狀物，則是消化沒(méi)有吹散開(kāi)或消化過(guò)度導(dǎo)致的細(xì)胞抱團(tuán)自救，建議在細(xì)胞密度變高后改善消化過(guò)程。

消化過(guò)度可能導(dǎo)致部分細(xì)胞的細(xì)胞膜受損、凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。可以用PBS洗掉凋亡細(xì)胞后，提高一定血清濃度培養(yǎng)，并且改善消化時(shí)間。

· 細(xì)菌污染

細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，鏡下可見(jiàn)黑色的到處亂跑的黑點(diǎn)。細(xì)胞一旦出現(xiàn)細(xì)菌污染，爆發(fā)會(huì)很快，培養(yǎng)基很快會(huì)出現(xiàn)渾濁，且細(xì)胞狀態(tài)明顯變差。

· 真菌污染

一般培養(yǎng)液清亮不變色，鏡下有絲狀物。有些真菌開(kāi)始很像死細(xì)胞碎片，只是有很多很多的小塊很清楚，呈珊瑚狀，不像細(xì)胞碎片分不清，慢慢會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長(zhǎng)的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)。

實(shí)驗(yàn)室較典型的污染真菌是白色念珠菌，它存在于人的口腔和生呼吸道等處。

· 霉菌污染

培養(yǎng)基是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)。在37度孵箱中培養(yǎng)2~3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)明顯菌絲。長(zhǎng)時(shí)間后，細(xì)胞雖然仍可生長(zhǎng)，但活力狀態(tài)變差。

· 支原體污染

支原體為黑色小點(diǎn)，培養(yǎng)基一般會(huì)渾濁。支原體感染細(xì)胞后，細(xì)胞病變不明顯，只是慢慢死亡。