-
輔助方案 TCA 沉淀測定標記摻入量
發布時間： 2022-03-10 點擊次數： 922次原理
材料與儀器
被標記的細胞懸液（見基本方案或備擇方案 1～4）
0.1％（m V）BSA／0.02%（m V）NaN3 10%TCA 溶液 冷凍乙醇
連接真空管道的濾過裝置 2.5 cm 玻璃微纖維濾膜（Whatman GF／C）步驟
1. 加 10～20 μl 被標記的細胞懸液到 0.1 ml 0.1％（m/V）BSA/0.02％（m/V）NaN3 中，置于冰上。
2. 加 1 ml 冷凍的 10％（m/V）TCA 溶液。劇烈振蕩混勻，在冰上孵育 30 min。
3. 在真空濾過裝置內，濾過細胞懸液到 2.5 cm 玻璃微纖維濾膜上。
4. 用 5ml 冷凍 10％TCA 溶液洗膜 2 次，再用乙醇洗 2 次。空氣干燥 30 min。
5. 在玻璃微纖維濾膜上點同樣體積（見步驟 1，10～20 μl）的放射性標記的細胞懸液，在空氣中干燥。
6. 轉移濾膜到 20 ml 閃爍管里，加 5 ml 閃爍記數溶液，用閃爍記數儀測定放射活性。
7. 計算 TCA 沉淀標記（見步驟 4）與總放射活性的比值（見步驟 5）。
注意事項
１. TCA 有強烈腐蝕性。在制備和操作 TCA 溶液時注意保護眼睛并避免皮膚接觸。
2. 洗液應按照混合化學/放射性廢棄物處理。根據安全規程進行處理。
常見問題
同實驗其他方法
氨基酸代謝標記實驗
1. 室溫融化 [35S] 標記甲硫氨酸，并用預熱的（37℃）脈沖標記培養基制備 0.1~0.2 mCi/ml 的工作溶液。2. 室溫下 300 g 離心 5 min，獲得懸液中 0.5 × 107~
備擇方案 1 對貼壁細胞
1. 在 100 mm 組織培養皿中培養細胞到 80%~90% 融合（0.5 × 107~2 × 107 細胞，取決于細胞類型）。2. 如上所述制備 [35S] 甲硫氨酸的工作液體（見基本方案步驟 1
備擇方案 2 示蹤標記細胞
1. 每個時間點和每個樣品準備 0.5 × 107 ~2 × 107 細胞， 每 0 .5 × 107 ~2 × 107 細胞用 2 ml 0.1~0.2 mCi/ml [35S] 甲硫氨酸脈沖標記
以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務，努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業。
- 下一篇：補體介導法
- 上一篇：備擇方案 3 長期細胞標記
銷售熱線
