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貼壁細胞和懸浮細胞如何傳代?
發布時間: 2024-01-16 點擊次數: 507次1.貼壁細胞如何進行傳代?
去掉原T25培養瓶里面的培養基,T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細胞,顯微鏡下觀察,待細胞變圓,細胞間隙明顯,部分細胞剛開始脫離瓶壁,加4 ml左右(血清)細胞培養液混勻終止消化,將細胞小心吹打下來,1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清,細胞沉淀用(血清)細胞培養液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶補足培養基至5-6 ml,37℃、5%CO2孵箱培養。
2.懸浮性細胞應如何傳代處理?
一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養液太多時,將細胞懸液移入離心管中,1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清,細胞沉淀用(血清)細胞培養液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加培養液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培養。有些懸浮細胞趨于成團生長,此時細胞生長狀態良好,當補液時,需避免反復吹打。